1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
前 言
近年来，随着水产养殖规模化和集约化的推广，世界鱼类养殖业得到了迅猛的发展。然而养殖密度过高，恶劣的水质等应激因子会抑制鱼类的免疫系统，增加其染病几率，并造成养殖鱼类体脂过度沉积的现象，给水产养殖业带来巨大的经济损失。抗生素在水产养殖业中的应用主要可以降低某些营养成分的需求量、促进生长及防治疾病。但是，使用抗生素会抑制鱼类的免疫系统、残留在鱼类组织、导致耐药病原体的产生，污染环境、危害人类健康。并且，大量使用抗生素还会抑制鱼类的生长。这就要求开发新的无污染、无残留、促生长、抗疾病的饲料添加剂产品。
银杏(Ginkgo biloba L.)，银杏科、银杏属植物。其叶中蛋白质、糖、维生素C、维生素E和胡萝卜素含量相当丰富，还含有独特的多种活性成分，黄酮类、萜内酯化合物。研究表明，银杏叶中含有的黄酮类化合物、萜类化合物和有机酸类使其具有抗氧化的特性和清除自由基的药理活性。利用微生物发酵银杏叶可以显著提高银杏叶中的营养物质与有效成分，并且，用于发酵的微生物都是经过筛选的有益菌种，可以有效促进机体的生长发育，提高机体免疫力。发酵银杏叶作为饲料添加剂主要应用于禽畜中，可以有效提高生产性能，增强免疫及抗氧化功能，改善脂肪代谢等，但在水产养殖中未见相关报道。
团头鲂（Megalobrama amblycephala）俗称武昌鱼，鲤形目，鲤科，鲂属，肉质鲜美，生长快，经济价值高，是我国主要的淡水养殖品种之一。但相对于鲤、鲫等鱼类，团头鲂不耐低氧和运输，因此在养殖生产过程中经常受到外界不利因素的影响产生应激，造成受伤、死亡，并且，团头鲂在生长过程中易发生脂肪过度沉积和代谢紊乱，影响其生长。近年来，团头鲂因养殖密度高而病害频发，严重制约着团头鲂产业的发展。本试验以产朊假丝酵母菌与黑曲霉共发酵银杏叶为饲料添加剂，来研究其对团头鲂幼鱼的免疫、抗氧化、脂肪代谢及抗病力的影响，为银杏这一良好的生物资源应用于水产饲料添加剂提供参考依据。
1 材料与方法
1.1试验幼鱼及分组
团头鲂幼鱼购自扬州市国家级水产原良种场。选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂600尾，个体初重为（9.310.09）g/尾。随机分为5组，分别为基础日粮对照组（Cont.）及5个发酵银杏叶（FGB1、FGB2、FGB3、FGB4）组（分别在基础日粮中添加FGB为0.125%、0.25%、0.5%、1.0%），每个重复30尾试验鱼。养殖试验在江苏省南京市浦口区南京农业大学水产养殖基地进行，采用室内可控温循环水系统（规格为直径0.9m，深0.8m）饲养。
1.2试验日粮
银杏叶发酵物为产朊假丝酵母菌与黑曲霉双菌发酵银杏叶的产物，发酵工艺见文献。试验日粮采用全价配合料（表1），主要原料为鱼粉、豆粕、菜粕、棉粕、豆油、鱼油、麸皮、面粉、磷酸二氢钙、预混料、食盐等。各种原料分别粉碎过60目筛，先把磷酸二氢钙、添加剂、生物素混匀，再加大料逐级充分混匀，加适量水，用小型制粒机制成2.0mm的颗粒饲料，避光通风晾干，储存于-20℃冰箱中备用。
1.3日常管理
将幼鱼驯养一周后正式开始养殖试验。每日8:00、12:00、17:00投喂，保持饱食投喂，试验持续60d。饲养过程中每天8:00、16:00测量水温，每周测一次水质。实验期间保持水温250.3℃、水体PH7.0～7.5、氨氮＜0.4mg/L、亚硝态氮＜0.064mg/L。
表1 基础日粮组成及营养水平
Table1 The basic diets and nutrition levels
日粮组成Ingredients | 含量(%)Content（%） |
鱼粉Fish meal | 8.00 |
豆粕Soybean meal | 30.00 |
菜粕Rapeseed meal | 16 |
棉粕Cotton meal | 16 |
豆油Soybean oil | 2 |
鱼油Fish oil | 2 |
麸皮Bran | 13 |
面粉Flour | 10 |
磷酸二氢钙Calcium dihydrogen phosphate | 1.8 |
预混料1Premix1 | 1 |
食盐Salt | 0.20 |
合计Total | 100 |
含水量Moisture(%) 粗蛋白Crude protein（%） 粗脂肪Crude fat（%） 灰分Ash（%） 总能Gross energy（MJ/Kg） | 6.62 32.49 10.19 10.48 18.17 |
注：1每千克预混料中含矿物质：硫酸铜2.0g，硫酸铁25g，硫酸锌22g，硫酸镁7g，亚硒酸钠0.04g，碘化钾0.026g，氯化钴0.1g。每千克预混料中含维生素：维生素A9000 000IU，维生素D200000IU，维生素E4500mg，维生素K3220mg；维生素B1320mg；维生素B21090mg，维生素B52000mg，维生素B6500mg，维生素B121.6mg，维生素C5000mg，泛酸1000mg，叶酸165mg，胆碱60000mg。
Note: 1Premix supplied the following minerals (per kilogram diet): CuSO45H2O 2.0g, FeSO47H2O 25 g, ZnSO47H2O 22 g, KI, 0.026 g, MnSO44H2O 7 g, Na2SeO3 0.04 g, CoCl26H2O 0.1 g. Premix supplied the following vitamins (per kilogram diet): VA 900000IU, VD 200 000 IU, VE 4 500 mg, VK3 220 mg, VB1 320 mg, VB21 090 mg, VB5 2 000 mg, VB6 500 mg, VB12 1.6 mg, VC 5 000 mg, pantothenate 1 000 mg, folic acid 165 mg, choline 60 000 mg.
1.4样品采集
采样前停止饲喂24h，分别对各缸中的鱼计数，称重。从每缸中随机取5尾鱼进行麻醉（MS-222，浓度为100mg/L），注射器尾静脉取血，置于预先准备好的抗凝管中，并于4℃2500转离心，分离血浆，-20℃保存，迅速分离肝胰脏并-20℃保存，迅速分离出腹脂以计算腹脂率。
1.5攻毒试验
养殖试验结束后，选择体重基本一致的鱼进行功毒试验，每组4个重复，每个重复均取10尾鱼。试验用嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的菌种由中国水产科学研究院淡水渔业研究中心提供。按王文博等[12]所述方法，将两次活化后的细菌用无菌生理盐水稀释，使最终浓度为1106 cells/mL，按每100g鱼重腹腔注射菌液1.0 mL，然后放回相应缸中，保存充足的氧气，并于接下来的7 d里统计死亡率。
1.6测定指标与方法
血清酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LZM）、髓过氧化物酶（MPO）、免疫球蛋白M（IgM）的测定均采用购自南京建成生物工程研究所的试剂盒。具体操作方法按试剂盒的说明书进行。
1.7数据统计与分析
试验数据采用平均值标准误表示，采用SPSS 20.0软件中的单因素方差分析法(One-way ANOVA)对数据进行方差分析，并采用Duncan氏法对数据进行显著性检验，差异显著性水平设为P0.05。
2. 参考文献（不低于12篇）
[1] 林淑慧. 银杏叶提取物对肉鸡免疫功能影响的研究[D]. 福州：福建农林大学, 2009.
[2] 金 立. 中药-银杏叶复合饲料添加剂的制备及效果研究[D]. 南京：南京农业大学, 2009.
[3] 王改琴, 张旭晖, 王 恬. 不同油脂日粮中添加RRR-α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡生产性能、抗氧化和免疫功能的影响[J]. 动物营养学报, 2010, 22（3）：653661.
