可视化环介导等温扩增技术检测Phytophtha tentaculata的研究任务书

 2022-04-24 11:04

1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等

1. 方案拟定：科学合理，具有可行性。

论文时间安排： 2015.1.20―2014.3.15：查阅文献，做好预备实验； 2014.3.16－2014.5.20：针对木香疫霉菌（Phytophtha tentaculata），筛选出1-2个分子检测靶标，优化检测技术参数，提高分子检测技术准确率，缩短检测时间，建立木香疫霉菌的可视化环介导等温扩增技术； 2014.5.21－2014.6.1：整理试验数据，撰写毕业论文，准备答辩。

2. 实验数据采集与处理：木香疫霉菌的可视化环介导等温扩增技术 1）可视化环介导等温扩增技术的特异性引物的设计：通过对病原卵菌的核心基因的筛选选择具有保守性的引物序列，利用专门针对恒温环式扩增在线软件对不同疫霉菌设计相关的特异性引物（LAMP引物设计网站地址：http://venus.net-laboratory.com/partner/lamp/index.html)； 2）检测样品的制备：取样品少量样品用0.5N NaOH研磨后，取10uL研磨产物迅速稀释到490uL Tris-Cl(pH 8.0)中，其中取1.5uL溶液可直接用于恒温环式扩增，这种样品的制备方式可在5min中之内完成； 3）可视化环介导等温扩增技术：为了摸索最优的环介导等温扩增技术（LAMP)反应体系，对LAMP反应中的检测技术参数进行优化，主要包括：MgSO4浓度（28 mM），内引物的浓度（0.22 μM），dNTPs浓度（0.41.4 mM），甜菜碱浓度（0.21.4 M），HNB浓度（100300 μM），Bst DNA聚合酶添加量（0.320.64 U/μL），不同反应时间（3090 min）进行优化，确定了最终的反应体系； 4）可视化环介导等温扩增技术产物的快速检测：扩增反应前加入羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol dye），反应结束后阳性PCR管中扩增的DNA与染料结合可肉眼直接看到反应产物，阳性呈现天蓝色。

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2. 参考文献（不低于12篇）

（1） 潘翊，何金洋，刘亚敏，等. LAMP法检测超级细菌NDM-1基因. 医学动物防制，2011，27（5）:433-435.

（2） 韩长志，樟疫霉 (phytophthora cinnamomi) 的研究进展.南京林业大学学报 (自然科学版)，2012，4：033．

（3） 徐敬友，陆家云，方中达，雪松上疫霉种的研究.南京农业大学学报，1990，13(4): 24-29.

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