CRISPR/Cas9技术敲除酿酒酵母Ste5基因任务书

 2022-01-26 10:01

全文总字数:958字

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

细胞融合研究最深入的模型之一是酿酒酵母的交配细胞融合。

其细胞融合事件受G蛋白及其偶联受体与MAPK激酶系统调控。

Ste5的模块化结构为MAPK组件提供结合位点并定位到膜上,促进交配特异性信号的传导。

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2. 实验内容和要求

1. 掌握酵母培养及其转化的操作过程;2. 设计针对ste5基因的酿酒酵母sgRNA;3. 构建含sgRNA的CRISPR质粒;4. 转化酵母;5. 挑阳性质粒菌落PCR验证后做基因组PCR验证。

3. 参考文献

1. Choudhury S, Baradaran-Mashinchi P, Torres MP. Negative Feedback Phosphorylation of Gγ Subunit Ste18 and the Ste5 Scaffold Synergistically Regulates MAPK Activation in Yeast. Cell Rep. 2018 May 1;23(5):1504-1515. doi: 10.1016/j.celrep.2018.03.135. PMID: 29719261; PMCID: PMC5987779.2. ROBY P. BHATTACHARYYA, ATTILA REMNYI, MATTHEW C. GOOD, CALEB J. BASHOR, ARNOLD M. FALICK, WENDELL A. LIM. The Ste5 Scaffold Allosterically Modulates Signaling Output of the Yeast Mating Pathway. SCIENCE10 FEB 2006 : 822-826

4. 毕业设计(论文)计划

2021.01-2021.02 文献阅读,并完成开题报告2021.02-2021.03 完成毕业论文的第一章综述。

2021.03-2021.05 实验2021.05-2021.06 撰写论文

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