Thermotoga petrophila GH1 β-葡萄糖苷酶重组菌的表达及其对白藜芦的转化任务书

 2022-05-05 08:05

1. 1. 毕业设计(论文)的内容、要求、设计方案、规划等

1.前言

白藜芦醇是一种二苯乙烯类天然抗氧化物,它在自然条件下以自由态和糖苷两种形式存在,而其化学结构还分别存在顺式和反式两种异构体,植物中白藜芦醇主要以反式构象存在,同时研究表明反式异构体的生理活性远强于顺式异构体,通过现阶段的研究报道反式-白藜芦醇,具有抗癌、保护心血管、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗炎等多种药理作用,逐渐为人们所重视。由于化学合成白藜芦醇成本高、步骤繁琐且得率偏低,所以从植物中提取仍是白藜芦醇的主要生产方法。天然的白藜芦醇提取主要来源是葡萄(红葡萄酒)、虎杖、花生、桑椹等植物,其中虎杖所含白藜芦醇量最高,约为0.08%-0.45%,且在我国分布广泛、价格低廉,特别值得注意的是虎杖中所白藜芦醇苷(虎杖苷)的含量可达0.76-2.55%,两者区别仅在于白藜芦醇苷于3号位的酚羟基被糖基化,因此将白藜芦醇苷通过糖苷酶催化水解的方法可以通过转化白藜芦醇苷生成白藜芦醇,达到提高白藜芦醇产量的目的。

β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,EC 3.2.1.21)是一种能催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键的酶,存在于极端嗜热微生物中β-葡萄糖苷酶有可能主要用于对降低芳香族类毒性物质在菌体内的积累,对芳香族糖基化合物的糖苷键具有高效催化能力,同时极端嗜热菌来源的蛋白具有较好的热稳定性,有望实现高浓度条件下酶法转化白藜芦醇苷制备白藜芦醇的技术难题,所以本课题拟通过基因工程手段获得重组菌,高水平诱导表达得高效转化制备白藜芦醇的极耐热β-葡萄糖苷酶,对酶催化白藜芦醇苷的条件进行优化,本课题的研究可以为白藜芦醇的酶法转化制备提供理论依据。

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2. 参考文献(不低于12篇)

[1] H. Wang, L. Liu, Y.-X. Guo, D.-J. Zhang, Z.-L. Xiu. Biotransformation of Piceid in Polygonum cuspidatum to Resveratrol by AspergillusApplied Microbiology andBiotechnology. 2007, (75): 763-768.

[2] Docherty J J, Sweet T J, Bailey E et a1. Resveratrol inhibition of varicella-zoster virus replication in vitro.Antiviral Research, 2006,72:171-177.

[3] 吴少杰,杨志娟,朱丽华等.甘草皂昔生物转化的研究.中草药,2003, 34 (6) : 516-518.

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