菊粉酶基因在大肠杆菌中的表达纯化与活力测定任务书

 2022-06-01 09:06

1. 1. 毕业设计(论文)的内容、要求、设计方案、规划等

前言应包括研究背景意义、国内外研究现状、趋势、存在的问题和课题的立体依据。需要广泛查阅与课题有关的文献,充分掌握一手、二手资料,运用恰当充分。确定该论文研究的理论基础或依据。实验数据采集与处理要求养成及时记录实验报告的良好习惯,以真实实验为基础,将实验数据采集之后交由计算机分析处理,做到实验数据不仅真实可靠,而且清晰、明确。培养严肃的科研态度和严密的逻辑思维能力;掌握发酵操作的基本流程。结果分析要求论证逻辑紧密,概念准确。结论要求正确、凝炼课题研究的成果。附表和附图及书写要求规范,文字要求语言通顺,文字流畅、简练,书写整洁。

菊粉是由β-呋喃果糖以β-2,1-糖苷键相连,并在其还原端接一个α-吡喃葡萄糖基的果聚糖。菊粉呈直链结构,聚合度(DP)为2~60,相对分子质量在3500~5500之间。它主要存在于菊芋、菊苣、蒲公英、牛蒡和朝鲜蓟等植物体的根部或茎部,是一种来源丰富的可再生资源。菊粉酶是一类能水解菊粉生产果糖和果聚糖的酶。实验室前期利用基因工程的原理和方法,将来源于黑曲霉的内切菊粉酶基因克隆到表达载体pETDuet,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。本论文中重组菌经IPTG诱导后对表达产物进行纯化分析和酶活检测以及酶水解产物分析。

主要内容:(1)以大肠杆菌BL21(DE3)为表达宿主,对重组质粒pETDuet-Inu进行诱导表达;(2)确定合适的诱导表达条件;(3)确定菊粉酶的酶活力测定方法;(4)对重组蛋白进行初步纯化。

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2. 参考文献(不低于12篇)

[1] 陈晓明,陈寒青,陈天祥,等. 菊粉酶的酶学特性与分子生物学[J] . 食品与生物技术学报, 2009, 28( 5) B 577- 588.

[2] Linghua Zhang, Changxin Zhao, Daochen Zhu, et al. Purification and characterization of inulinase from Aspergillus niger AF10 expressed in Pichia pastoris[J]. Protein Expression and Purification. 2004,35 272275

[3] Tong Zhang,Zhe Chi, Zhenming Chi, Jean-Luc Parrou and Fang Gong. Expression of the inulinase gene from the marine-derived Pichia guilliermondii in Saccharomyces sp. W0 and ethanol production from inulin[J]. Microbial Biotechnology.2010, 3(5), 576582.

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