1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
1.前言
在我国，农林植物纤维资源非常丰富，每年农林废弃物有近10亿吨，工业纤维性废渣有数千万吨。目前，影响木质纤维资源生物转化技术实用化的主要障碍就是纤维素降解酶的生产效率和使用效率都很低，从而导致纤维素酶的使用成本要占到酶糖化纤维材料总成本的25~50%。主要原因之一是因为天然纤维素的有效降解需要由纤维素酶系中内切型葡聚糖水解酶、外切型葡聚糖水解酶和β-葡萄糖苷酶这三大主要组分充分发挥协同作用才能完成。其中酶制剂的成本问题是现阶段纤维素生物转化炼制向工业化发展的制约因素之一。
透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb)是一种类似于人血红蛋白的胞内可溶物质,它能够从分子水平上提高VHb工程菌对氧气的利用能力,从而提高生物量积累,提高重组蛋白产量并且提高氧气的利用率,基于此种特性,到目前为止,VHb已经在不同的宿舍菌内共表达实现了α-淀粉酶、青霉素酰化酶及PHB等多种生化产品发酵生产成功应用。其中,巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是目前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一。它不但克服了大肠杆菌表达系统不能表达结构复杂的蛋白质、表达的蛋白多形成不溶性包涵体、背景蛋白多、表达量一般不是很高等缺陷;弥补了哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统操作复杂,表达水平低,产业化生产造价昂贵的不足,还具有其他酵母表达系统无法比拟的优越之处,但是酵母为高耗氧微生物,在高密度发酵过程中常常会出现供氧不足而限制了细胞密度的情况。本实验室已经构建高产β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母基因工程菌拟通过在毕赤酵母中共表达VHb蛋白来改善基因工程菌对氧气的利用效率来提高酶蛋白的分泌量从而提高活力。
2. 参考文献（不低于12篇）
[1] Xiaofeng Wang, Yongchuan Sun, Yunjun Yan,et al. Intracellular expression of Vitreoscilla hemoglobin improves production of Yarrowia lipolytica lipase LIP2 in a recombinant Pichia pastoris. Enzyme and Microbial Technology, 2012;50:22-28.
[2] Jyh-Ming Wu, and Wei-Chang Fu.Intracellular co-expression of Vitreoscilla hemoglobin enhances cell performance and β-galactosidase production in Pichia pastoris. J. BIOSCI. BIOENG ,2011;6-10
[3]于慧敏, 史悦, 沈忠耀, 杨胜利CO差光谱法分析重组大肠杆菌中的透明颤菌血红蛋白.清华大学学报,2002;42 (5):615-618
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