1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
1.前言 β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)，又称β-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶，它能够水解结合于非还原性的末端β-D-葡萄糖苷键，同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基。β-葡萄糖苷酶能将果、蔬、茶中的风味前体物质水解为具有浓郁天然风味的香气物质，还能协助纤维素酶降解纤维素。 而β-葡萄糖苷酶的固定化研究起始于 1974年用丙烯酸的共聚物凝胶形式来固定化酶，至今，关于其固定化载体和方法的报道已有很多。目前用于固定化β-葡萄糖苷酶的主要方法有：吸附法、共价结合发、交联法、包埋法以及两种方法的联合使用。纤维素结合域（CBD）是绝大部纤维素降解酶的一个特定区域，它能够特异性的吸附到微晶纤维素上。目前，越来越多的 CBD 已经从各种纤维素降解酶中分离出来，并且发现它没有水解活性。许多的研究者已经阐述了CBD在生物技术方面具有巨大的潜在应用价值，目前CBD在酶或细胞固定化的应用方面越来越受到重视。 人参皂苷各单体成分普遍具有调节免疫系统、降低血清中胆固醇的含量、防治心血管疾病、消炎、解毒等生理功效. 研究发现,人参皂苷-Rh1、-Rh2具有较强的抗癌作用,其中人参皂苷-Rh2抗肿瘤作用最强。但令人遗憾的是人参皂苷 -Rh2在自然界中含量甚微,野山参中含量只有 0. 03 %。所以从天然人参中提取十分困难。而人参皂苷-Rg3的获得相对容易, 而且它的结构与人参皂苷-Rh2十分相似, 仅多一个糖基,去掉人参皂苷-Rg3分子C3侧链的O-Glc Glc中的一个β-葡萄糖基, 即可得到人参皂苷-Rh2, 进一步水解掉一个皂苷糖基,得到人参皂苷元。 综上所述，本实验尝试构建β-葡萄糖苷酶与CBD融合酶的表达载体，并在大肠杆菌中表达，将所产融合酶吸附固定于微晶纤维素上，并尝试用此固定化的β-葡萄糖苷酶对人参皂苷进行降解研究。 | |
2.实验方案与计划 研究内容： 1）构建β-葡萄糖苷酶与CBD融合酶的表达载体，并在大肠杆菌中表达。 2）将所产融合酶进行微晶纤维素吸附实验，测定固定化酶的酶学性质。 3）尝试用此固定化的β-葡萄糖苷酶对人参皂苷进行降解研究。 研究计划： 2013年3月中旬 文献检索，资料准备和基础积累 2013年4月初 构建β-葡萄糖苷酶与CBD融合酶的表达载体，并在大肠杆菌中表达。 2013年4月中旬 将所产融合酶进行微晶纤维素吸附实验，测定固定化酶的酶学性质。 2013年5月 固定化的β-葡萄糖苷酶对人参皂苷进行降解研究 2013年5月底 数据整理及论文定稿 |
2. 参考文献（不低于12篇）
［ 1］ 王华夫，游小青．茶叶中β-葡萄糖苷酶活性的测定［J］．中国茶叶，1996( 3) : 16- 17．
［ 2］ 陈向东，藤尾雄策．日本根霉胞外β-葡萄糖苷酶的纯化及部分特性［J］．微生物学报，1997，37( 5) : 368-373．
［ 3］ 谢宇，尚晓娴，胡金刚．β-葡萄糖苷酶纯化及酶学性质研究［J］．江西农业大学学报，2008，30( 3) : 521- 524．
