提取分离非特异性DNA用磁性微珠研制任务书

 2021-08-20 22:34:09

1. 毕业设计(论文)主要内容:

DNA的提取分离应用面很广,在临床检测、分子生物学研究几乎称为常规要求,DNA的提取分离经历了很多改进,磁性微珠方法是其中比较方便、有效的方法,其原理是在一定盐(如NaCl, MgCl2, CaCl2, KCl, LiCl 等)和聚乙二醇(PEG28000) 浓度的条件下,DNA可非特异性地结合于表面有COOH 末端磁粒上, 一旦结合, 可用体积分数为 70% 的乙醇对DNA -磁粒复合物进行彻底清洗, 最后用 Tris 缓冲液将DNA 洗脱下来。以PEG 作为杂交液的原因是 PEG 与蛋白有极好的相容性, 并能通过空间位置排斥效应将DNA 聚集于包覆有高分子的磁性微粒上, 这样便可除去样品裂解液中的大量蛋白质。另外,PEG 也可增加反应混合物的粘度, 使磁性微粒保持悬浮状态而不沉降。该法纯化DNA 具有不离心, 不用酚、氯仿等有机萃取剂, 提取时间短等特点。可纯化小到 PCR 片段、质粒, 大到分子含 200 kb 的BAC 等双链DNA。得到的DNA 可用于测序、限制性酶切及体外转录等。

但在应用中也发现,有时在提取分离DNA上,其提取效率可能低于其他方法,因此进一步提高磁性微珠品质、提高DNA提取效率对于临床DNA提取以及相关分子生物学研究都有一定帮助。

本课题拟合成新型含羧基的磁性微粒,以期提高DNA提取效率。

2. 毕业设计(论文)主要任务及要求

1. 查阅不少于15篇的相关资料,其中英文文献不少于3篇,完成开题报告。

2. 合成粒径适合要求的磁性微粒。

3. 实现磁性微粒的羧基化修饰。

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3. 毕业设计(论文)完成任务的计划与安排

第1-2周:调研阅读资料,准备开题第3周:开题,准备实验用品。

第4-14周:实验,中间穿插资料重新检索、撰写论文等。

第15周:撰写毕业论文,答辩。

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4. 主要参考文献

崔亚丽, 李铮, 房喻等,磁性微粒在核酸研究中的应用[J ],西北农业大学学报,2000,28(1)80-85

2. Philip J R D, Pargat S F, John E F, et al. Immobilization of polynucleotides on magnetic particles[J ]. Biochem J,1991, 278: 735~ 740.

3. 孙敏莉,张皓.,纳米磁性粒子在 DNA分离与纯化中的应用进展[J ],生物工程学报,2001,17(6),601-603

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