紫萍GS1-2部分基因的克隆与测序任务书

 2022-11-13 09:11

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

浮萍对于氮,磷有高效的吸收利用效率,我们可以利用这一点,利用浮萍来治理污水。这一功能的实现主要与浮萍体内GS/GOGAT(谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合成酶)有关。GS、GOGAT在植物叶片、根瘤以及根中均有分布,但在不同器官中GS/GOGAT循环的作用不尽相同。本实验研究的为紫萍,我们将利用分子生物学技术,利用基因库中已知的有相关功能基因,测定出紫萍中的GS1-2基因的缺失序列,从而进行进一步的基因表达上的研究,以期提高浮萍对于污水的处理能力。

2. 实验内容和要求

1、任务内容:查阅、利用已知的相关文献,对实验内容进行一定的分析,事先了解了实验中有可能出现的问题,然后进行相关的实验。实验过程按照PCR扩增,TA克隆,感受态细胞转化,挑选阳性菌,送样的步骤来进行。

2、任务要求:

(1)查阅相关资料了解谷氨酰胺合成酶的相关基因的功能,我们研究的GS1主要存在于植物细胞质中,在C3植物中,GS1的活性主要位于根内。在根中是同化吸收到体内的NH4 以及硝酸盐被吸收后在根中还原产生的NH4 。在本实验中,我们将会以紫萍的基因组为模板,设计获取紫萍中六号染色体上GS1-2基因的引物,利用PCR技术转录测得其中所未被测量的基因的序列。 (2)了解实验操作过程:利用PCR技术在特定温度下扩增,得到正确的目的基因。做TA克隆将目的片段与PMD19-T载体连接。将连接载体转入感受态细胞,加入液体LB培养基培养。再在加入氨苄的选择性培养基上进行筛选,挑出成功转进PMD19-T载体的大肠杆菌并加入LB液体培养基中进行扩大培养,最后将挑选出的菌液利用PCR技术进行阳性菌检测,将目的基因成功转入的阳性菌作为样本送到相关公司测序。

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3. 参考文献

[1]李秀峰 罗勇 罗小龙 陈晓峰.《水面浮萍对水体富营养化的自净作用研究进展》 江西化工 2016.5

[2]马大伟 陈桂生 杜彦辉 刘森.《人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆与测序》 宁夏医学杂志 2011.5

[3]莫良玉 吴良欢 陶勤南.《高等植物GS/GOGAT循环研究进展》 植物营养与肥料学报 2001.7

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4. 毕业设计(论文)计划

1、资料搜集2022年12月20日--2022年1月7日:浏览中国知网和万方数据库,询问导师,筛选参考文献。

2、实验操作2022年1月8日--2022年4月10日:按照PCR扩增,TA克隆,感受态细胞转化,挑选阳性菌,送样进行实验。

3、论文写作2022年4月11日--2022年5月4日:在导师指导下自主完成论文写作。

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