银杏叶生物饲料添加剂对断奶仔猪免疫与抗氧化功能的影响任务书

 2022-07-07 10:07

1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等

传统抗生素能显著提高畜禽的生产性能，但这些抗生素在畜禽体内的残留容易造成食品安全性问题，而天然植物饲料添加剂具有绿色、安全、无毒副作用或毒副作用低等特点，因此开发天然植物资源作为抗菌药物的替代物已成为饲料领域的研究热点之一。

银杏又称白果，属裸子植物银杏科的单型种，银杏叶中含有黄酮类、萜类、酚类等多种活性成分，具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化能力等作用。银杏叶及银杏叶的提取物，已经被广泛应用于医疗、食品防腐剂、植物保护和化妆品等领域，但国内对银杏叶作为饲料添加剂的研究较少。本研究旨在利用银杏叶中活性物质的药用价值，用以替代抗生素，探求银杏叶在畜禽生产中的推广应用前景。

近年来，益生菌以其独特的作用方式和生态效应，已被广泛应用于食品、医疗、畜禽和水产养殖等领域。在养殖业中相对使用抗生素而言，作为新型绿色添加剂的益生菌，由于其无残留、无污染以及不产生耐药性等特点，有其独特的优越之处，已逐步应用于畜禽业生产。

芽孢杆菌类微生物是一类好氧、可形成芽孢的革兰阳性菌，是国际公认的可在饲料制剂中食用的微生物菌种。

已有研究表明，芽孢杆菌在不利环境条件下能以孢子形式存在，在饲料制粒、贮存及胃酸环境中仍能保持较高的活性，在改善畜禽生产性能、维持肠道菌群平衡、提高消化率等方面均有较好的效果。芽孢杆菌为需氧菌，在生长过程中消耗大量的氧气，使肠道内氧气浓度降低，为肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌等生理性厌氧菌的生长繁殖提供有利环境；同时，使得需氧的有害病原菌的生长由于缺氧而受到抑制，从而使菌群失调得以调整、肠道功能得以恢复，最终使胃肠道的微生态体系处在健康平衡的状态，动物的免疫力得到提高。芽孢杆菌在生长代谢过程中能产生多种抗菌物质，如短杆菌肽、枯草菌素和多粘菌素等，对常见的致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较强的抑制作用。芽孢杆菌在生长的过程中，可产生蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶等多种助消化酶，同时在消除抗营养因子上也发挥了重要作用。

目前国内关于芽孢杆菌在饲料中的应用研究也比较多，而且取得了一定的应用效果。陈家祥等（2010）研究发现，日粮中添加地衣芽孢杆菌有益于肉鸡的肠道发育和盲肠微生物区系平衡，饲养前期50mg/kg添加水平，饲养后期200mg/kg添加水平显著优化了肉鸡的肠道组织结构，抑制了盲肠中有害菌的生长。周振峰（2006）研究发现，每千克精饲料中20亿单位的地衣芽孢杆菌可显著提高泌乳奶牛产奶性能，同时奶品质有所改善，并且奶牛抵抗热应激的能力增强。但目前尚无以银杏叶为主要原料，以益生菌芽孢杆菌为菌株，进行固态发酵制备的产品的研究报道，本研究将制备的产品应用于饲料添加剂中，以获得更为有效的饲喂效果。

方案拟定：实验的设计根据本课题组的方案统一进行。试验设计、材料与方法的描述要合理。

1 芽孢杆菌银杏叶固态发酵物的制备

1.1 营养盐溶液的配制：按葡萄糖1.5%（即每100mL营养盐溶液中含葡萄糖1.5g，下同），K2HPO4 0.3%，MnSO4 0.02%，MgSO47H2O 0.05%，FeCl3 0.01%的量依次称取并溶解于水中，配成营养盐溶液；

1.2 固体培养基的制备：按银杏叶粉末：豆粕：麸皮=7:2:1的比例称取三者，混匀；

1.3 按每10g固体培养基加12mL营养盐溶液的比例将上述两者混合，搅拌均匀，配制成发酵培养基；将配制好的发酵培养基在121℃温度下灭菌1h，取出，冷却；

1.4 在接种室进行常规的无菌操作，每10g发酵培养基接种地衣芽孢杆菌2mL（地衣芽孢杆菌的培养采用液体法，常规的种子液体培养法，37℃、180r/min下摇瓶培养），37℃下培养48h，发酵结束；

1.5 在低于80℃的条件下干燥，粉碎，即得。

2 试验动物及处理

选择同一品种、体重相近的21d断奶仔猪（大长）240头，随机分为4个处理组，每组6个重复，每个重复10头。处理I组为对照组，饲喂基础日粮（无银杏叶发酵物），处理II、III、IV组为试验组，分别在基础日粮的基础上，添加0.5%、1%和2%银杏叶发酵物干粉。试验基础日粮配方及营养成分见表1-1。

本试验预饲3天，正试验期35天。试验猪在相同环境下饲养，每圈10头分栏饲养，自由饮水和采食，每天饲喂三次(6:00、11:00、17:00)，自然光照和通风，执行常规免疫程序。

表1 断奶仔猪基础日粮组成及营养水平

Table1. Composition of diets to Weaning Piglets in each phase

Items

Content

Ingredient(%)

玉米 corn

61.00

豆粕 soybean

19.00

绿赛小猪宝 Lvsai concentrated feed

20.00

Analyzedcontent

Nutrientlevel

消化能 DE (MJ.Kg-1)

13.38

粗蛋白质 CP

19.80

赖氨酸 Lys

1.20

蛋氨酸 半胱氨酸 (M C)

0.75

钙 (Ca)

0.80

总磷 (tP)

0.72

注：绿赛小猪宝为苏州帝凯维动物营养有限公司生产的绿赛20%仔猪浓缩料，

包含断奶仔猪所需的鱼粉，乳制品和食用油。

3. 指标测定方法

3.1血浆抗氧化相关指标 血浆总抗氧化力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)，应用试剂盒测定（南京建成生物有限公司）。

3.3免疫学指标 溶菌酶，应用试剂盒测定（南京建成生物有限公司）；IgG，采用发射免疫法测定，试剂盒购于北京北康生化有限公司；IgA，采用ELISA酶联免疫法测定，采用BlueGene的Elisa试剂盒。

实验数据采集与处理：详细做好实验记录，数据分析用SPSS或SAS数据分析软件。要求会用Excle进行常规作图。

结果分析：对结果与分析的描述要求准确到位。

讨论和结论：应论点明确，重点突出，不能与结果重复、离题。

2. 参考文献（不低于12篇）

指定阅读的中文参考文献如下：

[1] 金 立. 中药-银杏叶复合饲料添加剂的制备及效果研究[D]. 南京：南京农业大学, 2009.

[2] 吴洪新, 阿拉木斯, 呼天明, 等. 达乌里胡枝子提取物对肉仔鸡生产性能、屠宰性能及免疫器官的影响[J]. 西北农业学报, 2010, 19（4）：59.

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