发酵银杏叶对团头鲂脂肪代谢的影响任务书

1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等

水产品因为它的营养与药用价值被人们逐步深刻地认识，使得其市场和消费群体逐步扩大，需求量逐年增加。过去十年，中国水产品总产量增长了9倍；人均占有量增长了7.2倍，是世界平均水平的2倍。水产鱼类产量在过去数十年里显著增加。

脂类（lipid）是脂肪（也称甘油三酯triglyceride, TG）和类脂的总称。脂类代谢对动物胴体品质和动物健康影响很大，营养性脂肪肝就是脂肪代谢障碍引起的疾病。在养殖动物中，鱼类易发生脂肪肝，集约化养殖鱼类，尤其是海水养殖鱼类脂肪肝发病率很高，病鱼抗应激能力下降，影响鱼肉品质，高温季节还会大量死亡，给生产造成巨大损失。

团头鲂（Megalobrama amblycephala）俗称武昌鱼，鲤形目，鲤科，鲂属，肉质鲜美，生长快，经济价值高，是我国主要的淡水养殖品种之一。但相对于鲤、鲫等鱼类，团头鲂不耐低氧和运输，因此在养殖生产过程中经常受到外界不利因素的影响产生应激，造成受伤、死亡，并且，团头鲂在生长过程中易发生脂肪过度沉积和代谢紊乱，影响其生长。近年来，团头鲂因养殖密度高而病害频发，且营养性脂肪肝是现代团头鲂养殖业中常见的疾病，严重地影响养殖团头鲂产业的发展。本试验以产朊假丝酵母菌与黑曲霉共发酵银杏叶为饲料添加剂，来研究其对团头鲂幼鱼的免疫、抗氧化、脂肪代谢及抗病力的影响，为银杏这一良好的生物资源应用于水产饲料添加剂提供参考依据。

2 材料与方法

2.1试验幼鱼及分组

团头鲂幼鱼购自扬州市国家级水产原良种场。选择健康、规格、重量基本一致的团头鲂600尾，个体初重为（9.310.09）g/尾。随机分为5组，分别为基础日粮对照组（Cont.）及5个发酵银杏叶（FGB1、FGB2、FGB3、FGB4）组（分别在基础日粮中添加FGB为0.125%、0.25%、0.5%、1.0%），每个重复30尾试验鱼。养殖试验在江苏省南京市浦口区南京农业大学水产养殖基地进行，采用室内可控温循环水系统（规格为直径0.9m，深0.8m）饲养。

2.2试验日粮

银杏叶发酵物为产朊假丝酵母菌与黑曲霉双菌发酵银杏叶的产物，发酵工艺见文献。试验日粮采用全价配合料（表1），主要原料为鱼粉、豆粕、菜粕、棉粕、豆油、鱼油、麸皮、面粉、磷酸二氢钙、预混料、食盐等。各种原料分别粉碎过60目筛，先把磷酸二氢钙、添加剂、生物素混匀，再加大料逐级充分混匀，加适量水，用小型制粒机制成2.0mm的颗粒饲料，避光通风晾干，储存于-20℃冰箱中备用。

2.3日常管理

将幼鱼驯养一周后正式开始养殖试验。每日8:00、12:00、17:00投喂，保持饱食投喂，试验持续60d。饲养过程中每天8:00、16:00测量水温，每周测一次水质。实验期间保持水温250.3℃、水体PH7.0～7.5、氨氮＜0.4mg/L、亚硝态氮＜0.064mg/L。

表1 基础日粮组成及营养水平

Table1 The basic diets and nutrition levels

注：1每千克预混料中含矿物质：硫酸铜2.0g，硫酸铁25g，硫酸锌22g，硫酸镁7g，亚硒酸钠0.04g，碘化钾0.026g，氯化钴0.1g。每千克预混料中含维生素：维生素A9000 000IU，维生素D200000IU，维生素E4500mg，维生素K₃220mg；维生素B₁320mg；维生素B₂1090mg，维生素B₅2000mg，维生素B₆500mg，维生素B₁₂1.6mg，维生素C5000mg，泛酸1000mg，叶酸165mg，胆碱60000mg。

Note: 1Premix supplied the following minerals (per kilogram diet): CuSO₄5H₂O 2.0g, FeSO₄7H₂O 25 g, ZnSO₄7H₂O 22 g, KI, 0.026 g, MnSO₄4H₂O 7 g, Na₂SeO₃ 0.04 g, CoCl₂6H₂O 0.1 g. Premix supplied the following vitamins (per kilogram diet): VA 900000IU, VD 200 000 IU, VE 4 500 mg, VK₃ 220 mg, VB₁ 320 mg, VB₂1 090 mg, VB₅ 2 000 mg, VB₆ 500 mg, VB₁₂ 1.6 mg, VC 5 000 mg, pantothenate 1 000 mg, folic acid 165 mg, choline 60 000 mg.

2.4样品采集

采样前停止饲喂24h，分别对各缸中的鱼计数，称重。从每缸中随机取5尾鱼进行麻醉（MS-222，浓度为100mg/L），注射器尾静脉取血，置于预先准备好的抗凝管中，并于4℃2500转离心，分离血浆，-20℃保存，迅速分离肝胰脏并-20℃保存，迅速分离出腹脂以计算腹脂率。

2.5 体组成

测定全鱼的水分、粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)的含量。以上参数的测定参照AOAC(1984)的方法：用105℃烘干至恒重测定样品水分；用FOSS凯氏定氮仪测定粗蛋白含量；用索氏抽提系统通过乙醚抽提失重法测定样品粗脂肪含量。

2.6 肠道消化酶活性的测定

(1) 蛋白酶活力

采用福林-酚试剂法(Folin-phenol)测定。pH7.5，底物酪蛋白质量浓度10mg/ml，在40℃条件下，每分钟水解酪素产生相当于1μg酪氨酸所需的酶量，规定为一个酶活力单位。

(2) 淀粉酶活力

采用碘-淀粉比色法测定。组织中每毫克蛋白在37℃与底物作用30分钟，水解10mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按试剂盒说明书操作。

(3) 脂肪酶活力

采用脂肪酶试剂盒测定。每克组织蛋白在37℃与底物作用1分钟，每消耗1μmol底物为1个酶活力单位。试剂盒购自南京建成生物工程研究所，按试剂盒说明书操作。

2.7数据统计与分析

试验数据采用平均值标准误表示，采用SPSS 20.0软件中的单因素方差分析法（One-way ANOVA）对数据进行方差分析，并采用Duncan氏法对数据进行显著性检验，差异显著性水平设为P0.05。

2. 参考文献（不低于12篇）

[1] 张旭晖, 都海明, 朱秋凤, 等. α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡抗氧化功能与肌肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41（3）：286294.

[2] 倪迎冬, 洪文杰, 任灵芝, 等. 大豆黄酮对母鸡蛋品质及后代仔鸡肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2007, 38（11）：11881194.

[3] 葛长荣, 赵素梅, 张 曦, 等. 不同日粮蛋白质水平对乌金猪肉品质的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2008, 39（12）：16921700.

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