1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等
1 前言
冬青（Ilex chinensis Sims.）属冬青科（Aquifoliaceae）冬青属（Ilex），为亚热带树种，产长江中下游地区，常生于山坡杂木林中。其叶色翠绿，四季常青，入秋红果累累，鲜艳美丽，挂果期较长，可从当年10月持续到次年45月，因此是园林绿化上优良观赏树种和美化绿化树种。冬青作为国家重点保护植物，历来作为城乡绿化和庭院观赏植物。宜在草坪上孤植，门庭、墙边、园道两侧列植，或散植于叠石、小丘之上，葱郁可爱。冬青采取老桩或抑生长使其矮化，用作制作盆景。
冬青育苗主要方式有播种育苗、扦插育苗和组织培养三种。冬青种子有很深的休眠性，用种子繁殖需要将种子用湿沙低温层积处理数月进行催芽，相当耗费时间。组织培养作为一种新兴的工厂化育苗途径，但成本较高，操作复杂，且移植后苗木成活率低。扦插是传统的无性繁殖法中应用前景最广的一种方法。与前两者相比,它具有简单易行、繁殖速度快、不受树种限制、繁殖系数较高、成本低的优点。
冬青作为乡土树种，并未被很好的开发利用、引入城市作为园林绿化树种，且在生产上普遍存在着苗源不足、价格偏高的问题。在冬青园林绿化应用及繁育技术方面的研究除大叶冬青、红果冬青、大果冬青等少数几个品种报道较多，特别是大叶冬青研究较深外，其它品种的研究报道极少。冬青属植物扦插较难生根，而利用不同激素及不同浓度处理能提高生根率。研究证明，外施的生根调节物质，促进了插穗多种酶的生成或活性加强，使插穗基部的呼吸强度增强，促进了形成层的分裂活动，使基部膨大，形成愈伤组织，有利于形成诱生不定根。常规的冬青扦插育苗成苗速度缓慢，也不能全年扦插育苗，而采用全光照自动喷雾扦插育苗，可有效加快繁殖速度，提高苗木质量。为深入研究冬青属植物，对该属资源的合理保护、开发利用等提供参考，需全面优化冬青属植物扦插繁殖技术。
2 方案拟定
材料取自江苏省句容市磨盘林场。
2.1 冬青硬枝扦插繁殖技术研究
采用不同浓度外源激素IBA及不同强度磁化水对冬青插穗进行处理，粉剂处理有2个因素，生长素浓度2个水平，磁场强度3个水平，共6个处理，每个处理3个重复，每个重复20根插穗，以清水处理为对照。
表1.外源生长素粉剂处理硬枝扦插试验设计
Table 1.Hardwood cutting experiment design with powdery auxin
编号 | 生长素（IBA）浓度/㎎㎏-1 | 磁场强度（GS） |
1 | 1000 | 1000 |
2 | 1500 | 5000 |
3 | 10000 |
生根测定的指标有：愈伤组织出现期（d）、不定根出现期（d）、生根率（％）、愈伤生根率（％）、皮部生根率（％）、混合生根率（％）、不定根数量（条）、根幅直径（cm）、根长（cm）、根粗（cm）。硬枝扦插7d后观察愈伤发生情况，以后每隔2～3d观察1次，至切口愈合、新根生出。
2.2 冬青硬枝扦插生理生化指标研究
2.2.1可溶性蛋白含量测定考马斯亮蓝G250染色法
取鲜样0.25g，加5mL蒸馏水研磨，在离心机中以3000r/min的转速离心10min，吸取上清液；吸取样品提取液1.0mL，放入具塞试管中，加5mL考马斯亮蓝G250溶液充分混合，放置2min，用分光光度计在波长595nm的光下比色。结果按以下公式：
可溶性蛋白含量=( CVT)/ ( VSWF1000 ) (mgg-1)
式中:C为标准曲线值，μg；VT为提取液总体积，mL；WF为样品鲜重，g；VS为测定时加样量，mL 。
2.2.2可溶性糖、淀粉含量测定测定蒽酮硫酸测定法
可溶性糖含量测定
取鲜样0.2g，加入10mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min，冷却后再加10mL蒸馏水，于沸水浴中提取30min，提取液过滤入25mL容量瓶，反复洗涤试管，定容至刻度。吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中，加入1.5mL蒸馏水和0.5mL蒽酮乙酸乙酯，再加5mL浓硫酸，充分振荡，立即放入沸水浴中，保温1min，取出冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测吸光度。结果按以下公式：
可溶性糖含量（%）=（从回归方程求得糖的量/吸取样品液体积提取液量稀释倍数）/（样品鲜重106）100%
淀粉含量测定
过滤残渣转移至试管中，加蒸馏水10mL，沸水浴15min，冷却后加9.2mol/L高氯酸（HCLO4）2mL，再在沸水浴中提取15min，冷却后过滤定容至25mL容量瓶，吸取0.1mL提取液加1.5mL蒸馏水。加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯和5mL98%浓硫酸，充分振荡后于沸水浴中保温1min，取出冷却至室温，在630nm波长下测OD值。结果按以下公式：
可溶性淀粉含量=（标准曲线换算出的淀粉含量提取液总体积0.9100）/（106显色测定时吸取样品液体积样品鲜重）
2.2.3过氧化物酶（POD）活性的测定愈创木酚法比色法
取样品0.2g，加20mmol/LKH2PO45mL，加入少量石英砂，置冰浴研钵中研磨成匀浆，4℃条件下以6000r/min离心15分钟，倾出上清液保存在冷处，残渣在用KH2PO4溶液提取一次，合并两次上清夜，处于冷处备用。取光径1cm比色杯只，于1只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL,为校零对照，另1只中加入反应混合液3mL，上述酶液1mL，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量吸光度值，每隔30秒读数一次，读数于波长470nm下测定5min内吸光度值的变化。以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA470/ming。结果按以下公式:
POD活性(Ug-1min-1)= ΔA470VT/ ( WVs0.01T)
以每分钟吸光值变化0.01为一个过氧化物酶单位。
式中：ΔA470为反应时间内吸光值的变化；VT为提取液酶液总体积，mL；Vs为测定时取用酶液体积，mL；W为鲜样品重量，g； T为反应时间，min 。
反应混合液：100mmol/L磷酸缓冲液50ml与烧杯中,加入愈创木酚28ul，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至溶解，带溶液冷却后，加入30%过氧化氢19ul，混和均匀，保存于冰箱中。
3 实验数据采集与处理
实验数据用Excel2007处理，分析并绘制指标变化图。
4 结果分析
4.1外源生长素浓度及磁场强度对插穗生根影响
4.2冬青硬枝扦插生根进程
4.3生根过程中营养物质含量动态变化
5结论
本论文通过对冬青（Ilex chinensis Sims.）进行春季硬枝扦插试验，研究不同浓度外源激素IBA（1000mg/kg、1500mg/kg）及不同强度磁化水(1000Gs、5000Gs、10000Gs)对冬青扦插生根的影响，并对生根过程中韧皮部营养物质含量和POD活性进行测定，以期找到最适合冬青扦插的繁殖技术和手段。
6.附表等的要求
图表要求简练合理，图表标题清楚，图表内有要说明的必须有所附注。
2. 参考文献（不低于12篇）
[1] 周心铁.红果冬青[J].湖北林业科技,2004,(1): 8
[2] 杜军，高艳鹏，宋书芳.红果冬青在兖州市的引种栽培调查[J]. 山东林业科技,2010，4：67-69.
[3] 钱永秋.谢福灿红果冬青扦插育苗技术的研究[J].安徽农学通报,2008,14(21)
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