N-糖基化位点类型与在毕赤酵母中表达的弹性蛋白酶糖基化水平关系任务书

 2023-05-15 09:05

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

本课题主要是通过利用基因定点突变、质粒提取、化学转化、电击转化及目的基因的亚克隆等分子生物学操作手段,在弹性蛋白酶引入两类不同的糖基化位点I类型(N-X-S/T),来研究不同N-糖基化位点类型在毕赤酵母中表达的弹性蛋白酶糖基化水平的关系。

2. 实验内容和要求

任务内容主要有:通过定点突变技术,将获得的目的基因转入大肠杆菌中进行大量扩增,然后提取克隆质粒进行测序,成功后,提取高浓度的克隆质粒,构建表达载体,然后用电击转化法转入毕赤酵母中,筛选出转化成功的菌株,再利用甲醇诱导,最后测定酶的表达量。

要求:在实验过程中,要规范操作,得到相应的突变类型的菌株,并记录实验数据,与野生型的菌株产的弹性蛋白酶进行对比,分析得出能提高表达量的糖基化位点情况。

3. 参考文献

[1]刘小杰, 陈启和. 弹性蛋白酶的研究进展[J]. 中国食品添加剂, 2004, 4:29-32.

[2]杨梅. 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[J]. 生物技术通报, 2011(4): 46-51.

[3]韩铭海. 弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N_糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 江南大学,2013.

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4. 毕业设计(论文)计划

第一阶段:调研、查阅相关资料。

第二阶段:设计实验方案,和大体时间安排。

第三阶段:完成糖基化对毕赤酵母表达的重组弹性蛋白酶稳定性的影响实验。

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