1. 毕业设计(论文)的内容和要求
本课题主要是通过利用基因定点突变、质粒提取、化学转化、电击转化及目的基因的亚克隆等分子生物学操作手段,在弹性蛋白酶引入两类不同的糖基化位点I类型(N-X-S/T),来研究不同的糖基化位点类型对重组弹性蛋白酶表达量的影响,探索提高在毕赤酵母中异源蛋白的新技术手段。
2. 实验内容和要求
任务内容主要有:通过PCR技术进行定点突变,在弹性蛋白酶的一级结构(N36,N43,N212,N266和N280)中引入两类糖基化位点类型即N-X-S和N-X-T,测定各个不同的突变蛋白在毕赤酵母中的表达量水平,从而得到这两类不同糖基化类型对弹性蛋白酶表达量的不同效果。
要求主要是:在实验过程中,要规范操作,得到相应的突变蛋白酶,并记录实验数据,与野生型的菌株产的弹性蛋白酶活性进行对比,分析得出相应的结果。
3. 参考文献
[1]刘小杰, 陈启和. 弹性蛋白酶的研究进展[J]. 中国食品添加剂, 2004, 4:29-32.
[2]杨梅. 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展[J]. 生物技术通报, 2011(4): 46-51.
[3]韩铭海. 弹性蛋白酶在毕赤酵母中表达及N_糖基化位点突变对重组酶的影响[D]. 江南大学,2013.
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4. 毕业设计(论文)计划
第一阶段:调研、查阅相关资料。
第二阶段:设计实验方案,和大体时间安排。
第三阶段:完成糖基化对毕赤酵母表达的重组弹性蛋白酶稳定性的影响实验。
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