重组水蛭素融合蛋白在大肠杆菌中表达研究任务书

 2021-10-25 09:10

1. 毕业设计（论文）的内容和要求

本课题针对重组水蛭素在原核生物大肠杆菌中难以表达和体内半衰期短的缺点，通过在重组水蛭素的N端融合本实验室自主发现的增溶标签Ffu312将重组水蛭素带至胞外表达，并在C端融合一段类弹性蛋白多肽（ELPs）标签，简化融合蛋白的纯化步骤且增加其体内半衰期。通过基因重组技术构建出载有增溶标签、重组水蛭素、类弹性蛋白多肽的三段式融合蛋白基因的大肠杆菌，并进一步优化表达条件，得到目的蛋白，其后利用ITC技术（可逆循环纯化技术）纯化出目的蛋白。对纯化后的单一蛋白进行酶切去除增溶标签，并纯化获得单一的高抗凝活性的重组水蛭素与类弹性蛋白多肽的融合蛋白，随后体外测定其抗凝活性及表征粒径。

论文要求

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2. 参考文献

1. Tan S , Wu W , Liu J , et al. Efficient expression and secretion of recombinant hirudin III in E. coli using the l-asparaginase II signal sequence[J]. Protein Expression and Purification, 2002, 25(3):0-436.

2. Greinacher A , Warkentin T E . The direct thrombin inhibitor hirudin[J]. Thrombosis and Haemostasis, 2008, 99(5):819---829.

3. Sohn J , Kang H , Rao K , et al. Current status of the anticoagulant hirudin: its biotechnological production and clinical practice[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2001, 57(5-6):606-613.

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