基于定向进化提高嘌呤核苷磷酸化酶催化Cladribine的效率任务书

 2022-01-29 06:01

全文总字数:3390字

1. 毕业设计(论文)的内容和要求

1.文献查阅:掌握文献查阅,使用网络资源如中国期刊网、维普数据库、超星数字图书馆、Elsevier电子期刊、Springer Link全文电子期刊等检索资源,查阅关于嘌呤核苷磷酸化酶的进化方面的相关文献。

2.文献阅读及综述:阅读与课题相关的外文与中文文献,了解国内外的研究动态,撰写文献综述。

3.明确实验任务:拟定实验方案 根据所查阅文献的内容,确定实验内容及方案,拟定科学可行的研究计划。

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2. 实验内容和要求

1.学习并掌握有关定向进化技术的原理和一般操作过程,熟练掌握工程菌的构建、定点突变、酶催化合成、HPLC检测等方法;2.对来源于Aneurinibacillus migulanus AM007的PNP进行同源建模,通过通过多序列比对,丙氨酸扫描,在线网站预测等手段预测可突变热点。

3.通过基因工程,定点突变对嘌呤核苷磷酸化酶进行分子改造,获得的突变体进行表达纯化。

4.纯化得到的嘌呤核苷磷酸化酶用于催化合成Cladribine,筛选出可提高Cladribine产率的突变体。

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3. 参考文献

[1] Serra, I.; Daly, S.; Alcantara, A.R.; Bianchi, D.; Terreni, M.; Ubiali, D. Redesigning the synthesis of vidarabine via a multienzymatic reaction catalyzed by immobilized nucleoside phosphorylases. RSC Adv. 2015, 5, 23569-23577.

[2] Zhu, S.; Song, D.; Gong, C.; Tang, P.; Li, X.; Wang, J.; Zheng, G. Biosynthesis of nucleoside analogues via thermostable nucleoside phosphorylase. Appl Microbiol Biot. 2013, 97, 6769-6778.

[3] Ubiali, D.; Serra, C.D.; Serra, I.; Morelli, C.F.; Terreni, M.; Albertini, A.M.; Speranza, G. Production, characterization and synthetic application of a purine nucleoside phosphorylase from Aeromonas hydrophila. Adv. Synth. Catal. 2012, 354, 96-104.

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4. 毕业设计(论文)计划

2020.12.30-2021.1.15 文献查阅,完成开题报告,熟悉实验仪器使用 2021.3.1-2021.3.30 完成定点突变所涉及到的实验 2021.4.1-2021.4.30 筛选出可高效催化合成Cladribine的突变体 2021.5.1-2021.5.31 整理数据并完成毕业论文答辩

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